PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)要求

PCR實驗指的是基因擴(kuò)增實驗，其特點是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法，PCR實驗室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域，博泰小編帶大家了解PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)要求有哪些。

一、PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)，樣品制備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域，并設(shè)有專用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密連接，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。

二、實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備，分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平，冰箱，離心機，加樣器，振蕩器等。

2、樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存，核酸提取，貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，生物安全柜，離心機，加樣器，振蕩器等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染，一般為+10Pa。

3、擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板的加入和主反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀，冰箱，離心機，加樣器等。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為-25Pa。

4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀，洗板機.加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，一般為-25Pa，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。

三、PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實驗工藝流，物流，人流與氣流，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實驗室之間的相互干擾，防止氣溶膠擴(kuò)散對實驗過程造成污染。PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴(yán)格控制送，排風(fēng)的比例以保證個實驗區(qū)的壓力要求。

四、PCR實驗室裝飾

實驗室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固，氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過度；墻體內(nèi)壁光潔，不積塵，耐腐蝕，易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙，無滲漏，光潔，耐腐蝕的要求。

五、PCR實驗室注意事項

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)，樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。

2、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)，擴(kuò)增區(qū)，擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應(yīng)大一些。